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雷帕霉素对细胞缝隙连接功能和连接蛋白表达的影响

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目的 观察雷帕霉素对人脐静脉内皮细胞HUVEC、大鼠肝细胞BRL-3A和小鼠肝细胞AML12细胞缝隙连接(GJ)功能及连接蛋白表达的影响。方法 采用CCK-8测定不同浓度雷帕霉素分别作用HUVEC、BRL-3A和AML12后的细胞存活率,筛选雷帕霉素不影响3种细胞生长的作用浓度;采用细胞接种荧光示踪法和Western blotting检测不同浓度雷帕霉素对HUVEC、BRL-3A、AML12的GJ功能及连接蛋白37(Cx37)和连接蛋白32(Cx32)的影响。结果 5、10、25、50 nmol·L-1的雷帕霉素分别作用HUVEC、BRL-3A、AML12细胞2 h,对细胞生长无显著性影响。采用以上浓度的雷帕霉素分别处理细胞后,与对照组相比,可降低calcein在GJ间的荧光传递(P<0。05),并且雷帕霉素浓度为25、50 nmol·L-1时,HUVEC细胞中的Cx37、BRL-3A和AML12细胞中的Cx32蛋白表达显著性下降(P<0。05)。结论 雷帕霉素作用HUVEC、BRL-3A、AML12细胞后,对不同细胞GJ功能具有一定的抑制作用,并且可下调Cx37和Cx32的蛋白表达。
The influence of rapamycin on gap junction function and connexin expression
Objective To investigate the effect of rapamycin on gap junction(GJ)function and connexin(Cx)expres-sion in HUVEC,BRL-3A and AML12 cells.Methods CCK-8 assay was used to detect the cell viability of HUVEC,BRL-3A and AML12 cells treated with different concentrations of rapamycin.Parachute dye-coupling assay and Western blotting were used to detect GJ function and Cx expression level.Results With rapamycin at 5,10,25,50 nmol·L-1 concentrations for 2 h,the cell growth of HUVEC,BRL-3A and AML12 were not affected,and the dye coupling were reduced comparing with control(P<0.05),and the expression level of Cx37 and Cx32 were significantly decreased at concentrations of 25 and 50 nmol·L-1(P<0.05).Conclusion Rapamycin could inhibit the GJ function and downregulate the expression of Cx37 and Cx32 in HUVEC,BRL-3A and AML12 cells.

RapamycinGap junctionConnexinHUVECBRL-3AAML12

魏尔婷、赵青、钟意、汤南

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广东医科大学药学院,广东东莞 523808

雷帕霉素 细胞缝隙连接 连接蛋白 HUVEC BRL-3A AML12

广东省医学科研基金

A2021161

2024

药学研究
山东省药品检验所 山东省药学会

药学研究

CSTPCD
影响因子:0.653
ISSN:2095-5375
年,卷(期):2024.43(2)
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