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微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

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以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列.测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别.将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-mcp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/ml、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-mcp-03.用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/ml,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带.
Cloning of Mucor pusillus Rennin Gene and Its Expression in Pichia pastoris GS115

张桂芝、武彬、井庆川、刘辉、石天虹、刘雪兰、魏祥法、刘瑞亭

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山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023

凝乳酶 毕赤酵母 克隆 表达

山东省农业科学院创新基金

2006YCX025

2009

山东农业科学
山东省农业科学院,山东农学会,山东农业大学

山东农业科学

CSTPCD
影响因子：0.578
ISSN：1001-4942
年,卷(期)：2009.(11)
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