摘要
为测定鸡TBK1 (ch TBK1)基因在家禽抗感染天然免疫中mRNA表达水平变化情况,本研究根据chTBK1序列,设计3对特异性引物,基于chTBK1和β-actin双标准曲线建立了荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,并测定在禽流感病毒刺激下鸡成纤维细胞(DF-1)中chTBK1表达量的变化情况.结果表明,建立的标准曲线Ct值与模板浓度的对数呈现良好的线性关系(R2均大于0.99),能特异地检测chTBK1,检测灵敏度可达59拷贝数/μL,且组内及组间变异系数小于2％;chTBK1在DF-1细胞中的mRNA水平在病毒刺激下呈现上升趋势.该qRT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为研究chTBK1在鸡抗病毒感染中的作用提供了有效工具.
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