大熊猫脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及miRNAs富集分析

Isolation,identification,and miRNAs enrichment analysis of exosomes derived from giant panda umbilical cord mesenchymal stem cells

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中文摘要：大熊猫脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)通过旁分泌所释放的外泌体在大熊猫保健与疾病治疗方面具有一定的应用前景.本研究旨在建立大熊猫UC-MSCs外泌体分离方法,开展生物学特征分析和分子鉴定,并研究UC-MSCs外泌体中miRNAs的种类与功能.采用超速离心法从大熊猫UC-MSCs培养上清中成功分离外泌体,通过透射电子显微镜进行形态学观察,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径大小,蛋白免疫印迹法检测特异性分子标记表达.采用Small RNA测序技术对UC-MSCs外泌体中的miRNAs进行鉴定,并对其靶基因进行了预测与功能分析.结果显示,大熊猫UC-MSCs外泌体呈圆形杯托状结构,直径为(79.15±4.81)nm,外泌体标志蛋白CD81与TSG101呈阳性表达而CALNEXIN呈阴性表达.大熊猫UC-MSCs外泌体中的miRNA主要为miR-148-3p(30.28％)与miR-21-5p(21.72％).本研究首次从大熊猫UC-MSCs培养上清中分离出外泌体,并对其所含的miRNAs进行富集分析及功能预测,为大熊猫UC-MSCs外泌体后续的功能研究及应用奠定基础.

作者：

安俊辉、李媛、王东辉、陈佳松、李红艳、梁小虎、封同英、蔡志刚、侯蓉、曾长军、刘玉良

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作者单位：

成都大熊猫繁育研究基地,四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室,成都610081

四川省大熊猫科学研究院,成都610081

四川农业大学动物科技学院,畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室,成都611130

关键词：

大熊猫脐带间充质干细胞外泌体 miRNA

基金：

成都大熊猫繁育研究基金会项目四川杰出青年科技人才项目

项目编号：

CPF2017-162020JDJQ0074

出版年：

2023

DOI：

10.16829/j.slxb.150664

兽类学报

中国科学院西北高原生物研究所,中国动物学会兽类学分会

兽类学报

CSTPCDCSCD北大核心

影响因子：0.804

ISSN：1000-1050

年,卷(期)：2023.43(1)

参考文献量11