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核盘菌角质酶的克隆、表达及活性分析

Cloning,expression and activity analysis of cutinase from Sclerotinia sclerotiorum

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角质酶可降解脂肪族或芳香族聚酯,对聚对苯二甲酸乙二醇酯也具有较好的降解作用,但目前市面上角质酶产品非常稀缺,因此寻求一种高效表达的角质酶用于工程酶的开发非常有必要.本研究从核盘菌中克隆得到8个角质酶基因,利用PCR结合RT-PCR技术筛选出主效基因SsCut-52,利用大肠杆菌Escherichia coli BL21将SsCut-52进行异源表达并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化,研究重组酶的特性及其致病性.SsCut-52全长为768 bp,N端有17个信号肽,进化树分析显示其氨基酸序列和葡萄孢属(Botrytis)角质酶同源性最高,和蜡盘菌属(Rutstroemia)角质酶亲缘关系也较近.SsCut-52在核盘菌侵染植物的过程中高效表达,在菌丝形成菌核的过程中表达量也高于其他角质酶基因.异源表达检测结果显示,角质酶以包涵体的形式存在,复性的SsCut-52在pH 6.0时活性最高,比活力达到3.45 U/mg,在pH为4.0-10.0时活性均较高.最适温度为20-30℃,当温度高于50℃时该酶的残余活性低于60％.植物叶片侵染结果表明,SsCut-52对核盘菌侵染板蓝根叶片具有一定的促进作用.

吕蕊花、史琳娜、张喜荣、冯昭

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陕西中医药大学医学技术学院,陕西咸阳712046

核盘菌 角质酶 硝基苯丁酸酯 原核表达 蛋白活性

陕西省自然科学基础研究计划陕西中医药大学学科创新团队项目陕西省教育厅一般专项科研计划陕西中医药大学科学研究计划

2021JQ-7252019-YS0421JK05952017PY01

2022

10.13345/j.cjb.210691

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2022.38(1)
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