生物工程学报2022，Vol.38Issue(3) ：1138-1148.DOI:10.13345/j.cjb.210599

重组靶向核糖体失活蛋白luffin-α-NGR的制备及抗肿瘤活性评价

Preparation of a recombinant tumor-targeting ribosome inactivating protein luffin-α-NGR and evaluation of its antitumor activity

周哲越 蒋欣怡 张宏瑞 黄志广 邹瑞 楼秋雯 王玉 朱振洪
生物工程学报2022，Vol.38Issue(3) ：1138-1148.DOI:10.13345/j.cjb.210599
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重组靶向核糖体失活蛋白luffin-α-NGR的制备及抗肿瘤活性评价

Preparation of a recombinant tumor-targeting ribosome inactivating protein luffin-α-NGR and evaluation of its antitumor activity

周哲越 1蒋欣怡 1张宏瑞 1黄志广 1邹瑞 1楼秋雯 1王玉 1朱振洪1
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作者信息

  • 1. 浙江中医药大学生命科学学院,浙江杭州310053
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摘要

将丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-α与肿瘤靶向肽NGR融合,制备luffin-α-NGR重组蛋白,并检测其对肿瘤细胞与血管生成的抑制活性.通过引物设计及PCR扩增获得luffin-α-NGR融合基因,与pGEX-6p-1载体连接后获得pGEX-6p-1/luffin-α-NGR重组质粒,质粒转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中表达,以GST亲和层析法分离纯化目的蛋白.MTT比色法、Transwell迁移实验以及鸡胚尿囊膜实验(CAM)检测其活性.结果表明,成功获得全长为 849 bp的luffin-α-NGR融合基因,目标蛋白在16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h后获得最佳表达,经SDS-PAGE和Western blotting分析,GST融合蛋白分子量为56.6 kDa,与预期一致.重组蛋白经GST亲和层析、蛋白酶精准酶切去除标签后,利用MTT法验证其对HepG2和MDA-MB-231细胞的抑制效果显著优于luffin-α.Transwell迁移实验和CAM实验证实重组蛋白luffin-α-NGR对肿瘤细胞迁移和血管生成具有明显的抑制作用.本研究成功地制备了重组蛋白luffin-α-NGR,并证实该重组蛋白对肿瘤细胞具有良好的抑制活性,为后续重组靶向蛋白药物的开发奠定基础.

关键词

丝瓜/核糖体失活蛋白/luffin-α/抗肿瘤/靶向肽

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基金项目

国家自然科学基金(81803992)

浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)(2020R410025)

出版年

2022
生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
参考文献量9
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