摘要
8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)是评价DNA氧化损伤较灵敏和稳定的生物标志物.文中采用竞争法建立一种快速、灵敏检测8-OHdG的胶体金免疫层析试纸条.将样品垫(玻璃纤维素膜)、结合垫(玻璃纤维素膜)、硝酸纤维素膜和吸水垫依此粘贴在聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)底板上,构建试纸条.通过柠檬酸钠还原三水合四氯金酸制备胶体金(gold nanoparticles,AuNPs),8-OHdG 配对的抗体(antibody,Ab)包被于 AuNPs 的外层(Ab coated AuNPs,Ab@AuNPs)作为探针.牛血清蛋白(bovine serum protein,BSA)与8-OHdG用碳二亚胺盐酸盐偶联制备人工抗原,作为检测线的包被抗原.羊抗鼠多抗(imunoglobulin G,IgG)作为质控线的包被抗体.对试纸条的硝酸纤维素膜、上样液的配方、金标抗体喷涂量等实验参数进行了优化.结果表明,硝酸纤维素膜(nitrocellulose film,NC)膜采用CN95,上样液的最优配方为1％BSA+3％吐温-20+3％蔗糖+0.9％NaCl溶液,最适金标抗体喷涂量为4 μL.利用试纸条在可见光下检测8-OHdG,根据检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线)的显色强度对比,可初步判断尿液中8-OHdG的含量水平.并通过T线的灰度值计算尿液中的8-OHdG的浓度,检测限为2.55μg/L.该方法简单、快速且有较好的特异性,可检测人体尿液中的8-OHdG含量,以初步评价人体的健康状态.
基金项目
浙江省自然科学基金(LY20D060008)
浙江省科技计划公益技术项目(LGG19F010008)
宁波市公益类科技计划(20211JCGY020387)
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