摘要
基于骆驼科动物单链抗体VHH结构域的纳米抗体具有分子量小、结构简单、溶解性好、稳定性强等多种优势,可通过吸入给药,在呼吸道病毒的防控中具有重要应用价值.里氏木霉是食品级的蛋白质生产宿主,其纤维素酶分泌量可达到80 g/L以上,有望用于药物蛋白的低成本生产.文中在密码子优化的基础上,使用组成型强启动子Pcdna1,实现了 SARS-CoV-2中和纳米抗体Nb20在里氏木霉中的重组表达.将Nb20与里氏木霉纤维二糖水解酶CBH Ⅰ的N端片段融合表达,并在二者间引入胞内KEX2蛋白酶切位点,于葡萄糖培养基中摇瓶发酵48 h可生产出浓度为47.4mg/L的Nb20蛋白.重组表达的纳米抗体能够与SARS-CoV-2刺突蛋白的受体结合区相结合,有望用于新型冠状病毒的中和.以上结果显示,里氏木霉在纳米抗体的重组表达中具有一定的应用潜力.
基金项目
国家重点研发计划(2018YFA0900500)
国家自然科学基金(32170037)
山东大学2020年教育教学改革研究一般项目(2020Y083)
山东大学青年学者未来计划()
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