摘要
为了更经济高效地制备胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1),本研究采用计算机模拟技术对3种IGF-1融合蛋白进行蛋白质结构预测与分子对接,筛选出酶切最适配的IGF-1融合蛋白表达形式.利用基因工程技术构建并鉴定了 IGF-1融合蛋白原核表达载体,并转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,获得重组子;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达后,对菌体的破菌上清进行亲和层析、脱盐、凝血酶酶切及酶切产物亲和层析纯化得到目的蛋白;通过3T3细胞增殖法建立活性评价体系并对获得的IGF-1进行活性测定.结果显示,构建的IGF-1融合蛋白原核表达载体序列正确,获得的重组子在25℃、0.05 mmol/L IPTG诱导16 h时融合蛋白为可溶性表达,经初步纯化、凝血酶酶切、再次纯化后可获得纯度大于90％的IGF-1目的蛋白,在建立的活性评价体系下测得制备的IGF-1比活为2.47×105 U/mg,与市售标准品接近.本研究建立了 一条用于制备IGF-1的完整工艺路线,为IGF-1药物的研制及工业化生产奠定基础.
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