摘要
为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣.利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid,BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130(高尔基标志蛋白)的表达.结果表明,与提取外泌体的"金标准",即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多.结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异.因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法.
基金项目
湖北省对外科技合作项目(2019AHB068)
湖北省实验动物资源开发及利用项目(2020DFE025)
武当特色中药研究湖北省重点实验室(湖北医药学院)开放课题(WDCM2021011)
湖北医药学院药护学院团队项目(2017YHKT02)
襄阳市科技局医疗卫生领域科技计划重点项目(2020YL26)
NETL
NSTL
维普
万方数据