摘要
DLP4(defensin-like peptide 4)是一种新型昆虫防御素抗菌肽,对革兰氏阳性细菌具有强大的抗菌活性而且不易产生抗药性.本研究利用类弹性蛋白(elastin-like polypeptide,ELP)的相变特性和蛋白质内含子(intein,Ⅰ)的C端断裂系统,通过构建重组表达质粒pET-ELP-I-DLP4,以大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主细胞,诱导表达后的重组蛋白通过简单的离心、pH和温度转变进行纯化得到DLP4.研究中发现,在表达纯化过程中蛋白质内含子发生了 C端提前断裂.为了解决这一问题,将其断裂为N端片段(I0N)和C端片段(I0c)后,分别与ELP或DLP4融合,构建了 pET-ELP-I0N和pET-ELP-I0c-DLP4两种重组表达质粒.分别在大肠杆菌中诱导表达,将表达后的菌液混合,使蛋白质内含子恢复C端断裂活性,最终得到的DLP4的得率约为1.49mg/L.抑菌试验证明纯化的DLP4表现出预期活性,这为DLP4在原核系统中的表达纯化提供了有效途径.
NETL
NSTL
维普
万方数据