摘要
为实现乳铁蛋白N叶的大规模制备,本研究对表达乳铁蛋白N叶的工程菌枯草芽孢杆菌pMA0911-D60Y/Y92D进行了发酵工艺的优化.确定了最佳的培养条件:以葡萄糖为最佳碳源,以胰蛋白胨为最佳氮源,在pH 7.0、温度28℃、发酵25.5 h条件下诱导表达目的蛋白,目的蛋白的IOD值高达68.03％.在10 L发酵罐上对重组菌株的发酵条件进行优化,获得如下的最佳发酵工艺,即采用300r/min转速,0-7 h时,在pH 7.5、30℃条件下培养菌体;7-25h时,在pH 7.0、28℃条件下诱导表达目的蛋白.发酵结束后,收集细胞并破碎后取上清液用HisTrap HP亲和层析及SuperdexTM 200(10/300 GL)亲和层析法对细胞上清液进行纯化至均一条带,获得了纯度＞94％的重组乳铁蛋白N叶,1 L菌体能制备23.5 mg纯蛋白.本研究为重组牛乳铁蛋白N-叶的高效制备奠定了基础.
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