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分泌抗PRRSV抗体的猪源单克隆B细胞永生化方法的建立

A method for immortalizing swine monoclonal B cells secreting anti-PRRSV antibodies

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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的高度接触性传染疾病,对社会经济造成重大损失.目前并未获得有效的中和抗体应用于科研及治疗中,所以建立一种筛选具有中和活性的单克隆抗体的方法,对PRRSV防治及抗原位点筛选具有重要意义.单克隆抗体在人类和动物的众多疾病治疗及诊断中得到广泛应用,而针对不同病原如何筛选出有效的中和抗体是目前急需解决的问题.在单克隆抗体筛选的众多方法中,B细胞永生化方法是一种有效的且大概率能获得单克隆中和抗体的方法.通过将bcl-6和bcl-xl两个基因中间通过f2a序列连接后构建到一个载体上,进行逆转录病毒包装.包装成熟的逆转录病毒感染免疫PRRSV的猪源淋巴细胞,并使用加入CD40L和IL21细胞因子的完全培养基培养,然后使用CD21作为筛选标记通过磁珠法进行B细胞筛选,最后对筛选得到的B细胞单克隆化并进行检测,验证是否有抗体分泌.结果显示,构建的质粒不论单独转染还是与病毒包装时的两种质粒共同转染,均可以成功表达,且包装病毒可成功感染细胞.感染后的淋巴细胞可以检测到抗体分泌,进一步筛选得到的B细胞也可以检测到抗体分泌.因此,本研究成功建立了 一种针对PRRSV的单克隆抗体筛选方法.

王健、张婧、李坤、孙普、李国秀、李娇阳、曹轶梅、赵志荀、袁红、付元芳、李平花、李冬、刘在新、卢曾军

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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046

兰州大学动物医学与生物安全学院,甘肃兰州730046

B细胞永生化 单克隆抗体 猪繁殖与呼吸综合征病毒 磁珠法

20JR10RA02220YF3NA005

2022

10.13345/j.cjb.210856

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2022.38(8)
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