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猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

Porcine circovirus type 2 induces apoptosis by exosomal miR-125a-5p targeting Bcl-2 in porcine lymphocytes

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为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达.结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-2 3′UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3′UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-2 3′UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低.这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.

段滇宁、沈华伟、潘艳敏、冯睿、张霖、陆灵光、刘建奎、邱龙新、陈洪博

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龙岩学院生命科学学院,福建龙岩364012

福建省预防兽医学与生物技术高校重点实验室,福建龙岩364012

动物源性人兽共患病防控福建省高校工程研究中心,福建龙岩364012

福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室,福建龙岩364012

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miR-125a-5p 猪圆环病毒2型 外泌体 细胞凋亡

321026282019L30112021J01568S202111312033

2022

10.13345/j.cjb.220239

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2022.38(8)
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