摘要
C型流感病毒是感染人的重要呼吸道病原,也可感染猪、狗等动物.聚合酶是C型流感病毒复制的核心,是研究病毒复制机制的重要靶标.然而目前没有商品化针对C型流感病毒聚合酶的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),一定程度制约了相关研究的开展.为了制备C型流感病毒碱性聚合酶2(polymerase basic protein 2,PB2)的MAb,本研究依据人酸性核磷酸蛋白32A(human acidic nuclear phosphoprotein 32 family member A,huANP32A)与流感病毒 RNA 依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)相互作用的特性,利用免疫共沉淀技术在真核表达系统中通过融合Flag标签的huANP32A(huANP32A-Flag)纯化并富集C型流感病毒RdRp(PB1、PB2、P3),并以之作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA与Western blotting方法筛选出 6 株(7B11-5、8A4-5,13D9-6、8D4-1、8D4-3、9F9-4)能稳定分泌识别 PB2 MAb 的阳性杂交瘤细胞株.经鉴定7B11-5、8A4-5,8D4-1和8D4-3抗体亚型为IgG1型,13D9-6抗体亚型为IgG2a型,9F9-4抗体亚型为IgG3,轻链均为κ链.进一步选取1株效价高的杂交瘤细胞8D4-1来制备腹水,测定收集的小鼠腹水抗体效价为1∶64 000.Western blotting结果显示,制备的MAb能够与C型流感病毒PB2发生特异性免疫反应;激光共聚焦试验结果表明,该MAb可准确检测C型流感病毒PB2的亚细胞定位.本研究通过huANP32A蛋白高效富集了 C型流感病毒的RdRp,并以该复合物为抗原制备的PB2 MAb具有较好的特异性,为C型流感病毒聚合酶检测、结构分析及机制研究奠定了基础.
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