生物工程学报2022，Vol.38Issue(9) ：3453-3465.DOI:10.13345/j.cjb.220199

APRT缺陷型CHO细胞系的建立及其重组蛋白表达能力评价

Development of an APRT-deficient CHO cell line and its ability of expressing recombinant protein

冯莹莹 肖梦珂 路江涛 王小引 柴玉荣 王天云 贾岩龙
生物工程学报2022，Vol.38Issue(9) ：3453-3465.DOI:10.13345/j.cjb.220199
✕
  • NETL
  • NSTL
  • 维普
  • 万方数据

APRT缺陷型CHO细胞系的建立及其重组蛋白表达能力评价

Development of an APRT-deficient CHO cell line and its ability of expressing recombinant protein

冯莹莹 1肖梦珂 1路江涛 1王小引 2柴玉荣 3王天云 2贾岩龙1
扫码查看

作者信息

  • 1. 新乡医学院药学院,河南新乡453003;新乡医学院重组药物蛋白表达系统国际联合实验室/河南省生物创新药物工程技术研究中心,河南新乡453003
  • 2. 新乡医学院重组药物蛋白表达系统国际联合实验室/河南省生物创新药物工程技术研究中心,河南新乡453003;新乡医学院基础医学院,河南新乡453003
  • 3. 新乡医学院重组药物蛋白表达系统国际联合实验室/河南省生物创新药物工程技术研究中心,河南新乡453003;郑州大学基础医学院组织学与胚胎学系,河南郑州450001
  • 折叠

摘要

中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞是生产复杂重组药物蛋白的首选宿主细胞,腺嘌呤磷酸核糖转移酶(adenine phosphoribosyltransferase,APRT)催化腺嘌呤与磷酸核糖缩合形成腺苷一磷酸,是嘌吟生物合成步骤中的关键酶.采用基因编辑技术敲除CHO细胞中aprt基因,验证获得的APRT缺陷型CHO细胞系的生物学特性;构建两种真核表达载体:对照载体(含有目的基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和弱化载体(含有启动子和起始密码子突变的 aprt弱化表达盒及EGFP),分别转染APRT缺陷型和野生型CHO细胞并筛选获得稳定转染的细胞池;重组CHO细胞传代培养60代并用流式细胞术检测EGFP表达的平均荧光强度,并比较不同实验组重组蛋白EGFP的表达稳定性.PCR扩增和测序结果表明,CHO细胞aprt基因成功敲除;获得的APRT缺陷型CHO细胞系在细胞形态、生长增殖、倍增时间等生物学特性方面与野生CHO细胞无显著差异.目的蛋白瞬时表达结果表明,与野生型CHO细胞相比,转染对照载体和弱化载体的APRT缺陷型CHO细胞系中EGFP的表达分别提高了42％±6％和56％±9％;特别是长期传代培养时,转染弱化载体的APRT缺陷型细胞中EGFP表达量显著高于野生型CHO细胞(P＜0.05);构建的基于APRT缺陷型CHO细胞系能够明显提高重组蛋白的长期表达稳定性.研究结果为建立高效稳定的CHO细胞表达系统提供了一种有效的细胞工程策略.

关键词

中国仓鼠卵巢细胞/腺嘌呤磷酸核糖转移酶/基因敲除/重组蛋白表达

引用本文复制引用

基金项目

出版年

2022
生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
被引量1
参考文献量1
段落导航相关论文