摘要
肠道微生物群落结构和多样性与人体疾病密切相关.然而,相关群落结构分析结果可能受到DNA提取质量等实验因素影响.因此,评估不同DNA提取方法对肠道特定种属的提取效果,对于全面、准确获取人体肠道微生物谱,深入探究肠道微生物群落结构具有指导意义.本研究旨在借助实时荧光定量 PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)技术,以 DNA提取纯度、浓度,以及对肠道中特定种属微生物基因组DNA的提取丰度为指标,对5种DNA提取方法进行比较分析.结果表明,试剂盒Q的提取效果最佳,特别是对乳杆菌属和双歧杆菌属等革兰氏阳性菌的提取效果较好.N试剂盒的平均DNA提取浓度较Q试剂盒低,但在纯度方面,二者无显著性差异.与其他3种商用试剂盒(M、PSP、TG)相比,N方法对肠道内指定微生物基因组的提取效果仅次于Q试剂盒,位居第二.相比之下,M试剂盒提取所得DNA,质量较高,但浓度偏低,对于肠道内革兰氏阳性菌的提取效果不很理想.TG试剂盒和PSP试剂盒提取所得DNA在浓度、质量以及细菌丰度方面均不及其他验证的试剂盒.综上,Q试剂盒可作为肠道微生态研究相关实验中获取高质量基因组DNA的提取方法.本研究结果为肠道微生态研究相关实验中基因组DNA提取方法的选择提供参考依据.
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