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携带CD163报告载体的猪诱导多能干细胞株的建立

Development of porcine induced pluripotent stem cells with a CD 163 reporter system

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猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型.然而PAM来源有限,难以满足当前需求.利用猪诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向巨噬细胞定向诱导是解决PAM细胞数量不足的有效方法.CD163是PAM细胞的重要标记,也是PRRSV等病毒的主要受体.建立实时报告CD163激活程度的报告系统对于建立并优化猪iPSCs向PAM的诱导分化体系具有指导意义.本研究利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统,设计靶向CD 163终止密码子的sgRNA并构建相应的打靶载体,将其导入到猪PAM中的检测报告系统.进一步将该报告系统导入猪iPSCs中,通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和EDU染色等手段来检测其安全性.将猪内源CD 163的报告载体系统转染至原代PAM中,检测到了红色荧光的表达,证明了该载体系统的可靠性;将CD163-reporter系统转染至猪iPSCs中,获得CD163 reporter-iPSCs.结果表明,CD163 reporter-iPSCs可以维持正常的多能性基因的表达,并具有与正常猪iPSCs一致的克隆形态和增殖能力.证实成功构建了 CD163的报告载体,并将其转染至猪iPSCs,获得含有CD 163报告载体的猪iPSCs系.该报告载体既不影响猪iPSCs的多能性,又能够实时指示CD 163的表达,为深入解析猪iPSCs分化为PAM的机制以及解析PRRSV等重大病原与宿主的互作研究奠定了基础.

岳威、张炬庆、吴晓龙、杨昕淳、沈巧艳、于帅、祝振硕、王承宝、张仕强、华进联

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西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西杨凌712100

西北农林科技大学动物医学院预防兽医系,陕西杨凌712100

CD163 猪繁殖与呼吸综合征病毒 诱导多能干细胞 报告载体 CRISPR/Cas9 猪

国家自然科学基金陕西省重点科技创新团队项目陕西省重点研发计划

320728062019TD-0362022NY-044

2023

10.13345/j.cjb.220288

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2023.39(1)
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