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副干酪乳酪杆菌ZY-1内源性质粒分析及其表达系统的构建与应用

Analysis of endogenous plasmids in Lacticaseibacillus paracasei ZY-1 and development of expression vectors

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高效稳定的乳杆菌表达载体的构建是实现其菌种改良和个性化菌株开发的关键.本研究从副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)ZY-1中分离出4个内源性质粒并进行功能分析.通过将pLPZ3与pLPZ4的复制子rep,与pNZ5319质粒的氯霉素乙酰转移酶报告基因cat、pUC19的复制子ori构建大肠杆菌.乳酸菌穿梭载体pLPZ3N与pLPZ4N,进一步加上启动子Pldh3和mCherry红色荧光蛋白,获得表达载体pLPZ3E与pLPZ4E.pLPZ3与pLPZ4质粒大小分别为6 289 bp和5 087 bp,GC含量分别为40.94％和39.51％.2个穿梭载体可成功转化至乳酪杆菌属中,pLPZ4N的转化效率(5.23×102-8.93×102 CFU/μg)略高于pLPZ3N.乳酸菌表达载体pLPZ3E与pLPZ4E转化至副干酪乳酪杆菌S-NB后,成功获得了 mCherry红色荧光蛋白的表达.以Pldh3为启动子构建的重组表达载体pLPZ4E-lacG转化得到的重组菌,其β-半乳糖苷酶酶活性高于野生型菌株.本研究成功构建了大肠杆菌-乳酪杆菌穿梭载体和表达载体,为乳酪杆菌基因工程菌株的研发提供了新的工具.

肖路遥、石婷婷、王苏滢、赵庆尧、李伟

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南京农业大学食品科技学院,江苏南京210095

副干酪乳酪杆菌 内源性质粒 穿梭载体 表达载体

国家自然科学基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金

31871771U1903108BK20201320

2023

10.13345/j.cjb.220663

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2023.39(3)
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