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山羊转录因子c-fos克隆、鉴定及功能分析

Cloning,identification and functional analysis of the goat transcription factor c-fos

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转录因子c-fos在细胞增殖、分化和肿瘤形成中发挥着重要作用.本研究旨在获得山羊c-fos基因序列并阐明其生物学性质,进一步利用过表达手段揭示c-fos在山羊皮下脂肪细胞分化过程中的调控作用.本试验以简州大耳羊为研究对象,用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆获得c-fos基因序列并分析其生物学性质;用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术检测cfos基因在山羊心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪和背最长肌7个组织以及皮下脂肪细胞诱导分化的0-120h的表达情况;用基因重组方法构建山羊pEGFP-c-fos过表达载体并转染至皮下前体脂肪细胞诱导分化后,用油红O和Bodipy染色从形态学上观察其对脂滴积聚的影响,用qPCR技术在mRNA水平上检测过表达c-fos对成脂分化标志基因的影响.结果表明,克隆的山羊cfos基因长1 477 bp[编码区(coding sequence,CDS)1 143 bp],编码380个氨基酸,亚细胞定位预测该基因主要分布于细胞核中;表达蛋白具有一个碱性亮氨酸拉链结构;c-fos基因在山羊皮下脂肪组织相对表达水平较高(P＜0.05),在皮下前体脂肪细胞诱导分化后48 h的相对表达水平最高(P＜0.01);过表达cfos可抑制山羊皮下脂肪细胞的脂滴形成,并极显著降低成脂标志基因AP2和C/EBPβ的相对表达水平(P＜0.01),且启动子结合位点预测存在多个结合位点.综上所述,cfos是山羊皮下脂肪细胞分化的负调控因子,通过调控4P2和C/EBPβ 基因的表达来发挥作用.

胡婷婷、王永、陈定双、龚成思、李艳艳、熊燕、王建梅、李志雄、林亚秋

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西南民族大学畜牧兽医学院,四川成都610041

西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室,四川成都610041

转录因子 c-fos 山羊 皮下脂肪 细胞分化

国家自然科学基金国家自然科学基金四川省应用基础研究计划重点项目西南民族大学中央高校基本科研业务费专项

32072723319021542022JDTD00303300222092

2023

10.13345/j.cjb.220708

生物工程学报
中国科学院微生物研究所 中国微生物学会

生物工程学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-3061
年,卷(期)：2023.39(4)
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