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正交设计优化广西火桐ISSR-PCR反应体系

Optimization for ISSR Reaction System of Erythropsis kwangsiensis by Orthogonal Design

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以广西火桐DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定广西火桐最佳反应体系及扩增条件.25μL体系中1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.06 U/μL Taq DNA聚合酶,3 ng/μL DNA模板,0.2 μmol/L引物;最佳扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,52℃退火45s,72℃延伸1.5 min,共30个循环;72℃最后延伸7min.扩增后的PCR产物在4℃保存.应用该ISSR体系对10个广西火桐样品进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.

代文娟、骆文华、马虎生、符支宏、唐文秀、赵博、盘波、黄仕训

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中国科学院广西植物研究所,桂林541006

广西师范大学生命科学学院,桂林541004

广西火桐 正交设计 优化

广西植物研究所基本业务费支持项目广西科技创新能力与条件建设项目

桂植业12009桂科能11217028

2013

生物技术通报
中国农业科学院农业信息研究所

生物技术通报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.505
ISSN：1002-5464
年,卷(期)：2013.(8)
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