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毕赤酵母电转化方法的探索

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旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率.采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量,在不同的电压下进行转化,计数转化后在平板上产生的克隆数,通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率.研究表明,用0.1 mol/L LiAc,0.01 mol/L DTT,0.6 mol/L sorbitol,0.01 mol/L Tris-HC1处理细胞可获得最佳转化效率;质粒DNA用量为10 ng时转化效率最高.使用0.1 cm电转杯,采用0.6 kV电压,对80μL细胞进行转化,转化效率最高,可达9.6×105/tg DNA;而使用0.2 cm电转杯,采用1.1 kV电压,对150 μL细胞进行转化,转化效率最高,可达8.8×105/μg DNA.采用优化后条件,用10μgpPIC9K质粒DNA转化GS115,可获得1.1×106个转化子.此外通过对3种常用毕赤酵母载体转化效率的比较,发现pPIC9K的转化效率约是pPICZαA的160倍,是pGAPZαA的2 900倍.采用优化后的转化条件,毕赤酵母的电转化效率从103-4提升到了106.采用单个电转杯最多可获得1.1×106个转化子.
Exploration of Pichia pastoris Electroporation Method

杨小盼、董立厚、万德有、华玲、刘蕴慧、高新

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军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室,北京100850

毕赤酵母 电转化 转化效率

国家自然科学基金十二五国家科技重大专项

811019572012ZX09301003-001-007

2013

生物技术通报
中国农业科学院农业信息研究所

生物技术通报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.505
ISSN：1002-5464
年,卷(期)：2013.(12)
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