摘要
目的:在糖基工程酵母中表达抗流感病毒单克隆抗体CR6261,并对其进行结构分析和活性测定.方法:从GenBank获得CR6261抗体的全基因序列,构建轻重链表达载体pPICZα-CR6261-H-L,电转入糖基工程酵母,利用甲醇诱导型启动子AOX1表达CR6261抗体蛋白,通过SDS-PAGE、Western印迹筛选表达菌株,用Protein A亲和层析、Superdex200凝胶过滤柱分离纯化抗体蛋白,应用ELISA方法对纯化后的蛋白进行活性鉴定.结果:CR6261抗体蛋白分泌在培养上清中,且纯化后的蛋白与糖基工程酵母表达的流感病毒血凝素蛋白HA5、HA7有结合活性,与商业化三价流感病毒裂解疫苗亦有结合活性.结论:实现了抗流感病毒单克隆抗体CR6261在糖基工程酵母中的表达,并初步检测了其广谱活性,可为酵母表达抗体蛋白药物制备提供参考,ELISA初步评价还显示了其在诊断上的应用前景.
基金项目
重大新药创制科技重大专项(2018ZX09101005-013-002)
国家自然科学基金(81773619)
国家自然科学基金(81673339)
NETL
NSTL
维普
万方数据