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抗GM-CSF纳米抗体的筛选与鉴定

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目的:制备抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)纳米抗体,并测定其亲和力.方法:分离提取GM-CSF免疫后羊驼外周血淋巴细胞总RNA,PCR扩增得到纳米抗体基因片段,与载体pHEN1重组后克隆至大肠杆菌TG1以构建初始文库,经拯救构建得到噬菌体展示纳米抗体文库,并对其进行生物淘选;通过大肠杆菌BL21(DE3)原核表达阳性纳米抗体克隆,并测定其亲和力.结果:构建了多样性良好且库容量为1.37×109 cfu的纳米抗体初始文库,3轮淘选后共筛选得到5株氨基酸序列差异性较大的纳米抗体,并对其中一株纳米抗体G1进行表达纯化,SDS-PAGE分析表明纳米抗体G1纯度较高,且有较高的亲和力(KD=2.95×10-8 mol/L).结论:制备了高亲和力的抗GM-CSF纳米抗体,可应用于相关炎症抗体药物研制和疾病监测等方面.
Screening and Identification of Anti-GM-CSF Nanobody

郭鹏利、周鹏、尚雨寒、周斌、张蕾、李紫晨、李山虎、季艳伟

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西北农林科技大学 食品科学与工程学院,陕西 杨凌 712100

北京大学 化学与分子工程学院,北京 100871

军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100850

纳米抗体 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 生物淘选 噬菌体展示文库

国家自然科学青年基金

31801627

2020

生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
年,卷(期)：2020.31(2)
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