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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因敲除的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系

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目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因缺失的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系.方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对CDH1基因的sgRNA,以lentiCRISPR v2质粒为骨架构建能表达此sgRNA和Cas9蛋白的重组质粒.测序鉴定后,将重组质粒与逆转录病毒包装质粒VSVG、PAX2在氯化钙介导下共同转入HEK293T细胞进行病毒包装,转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌MCF-7细胞.采用嘌呤霉素筛选CDH1缺失的乳腺癌MCF-7细胞,通过DNA测序、Western印迹及免疫荧光染色实验验证获得的MCF-7细胞.结果:构建了靶向CDH1的CRISPR/Cas9质粒;DNA测序和Western印迹实验结果表明获得了稳定敲除CDH1的人乳腺癌MCF-7细胞.免疫荧光染色结果显示,相比对照组,稳定敲除CDH1的MCF-7细胞中已无法明显观察到E-钙黏蛋白的表达分布.结论:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了CDH1基因缺失的MCF7细胞系,为进一步研究CDH1在肿瘤免疫治疗中的作用提供了基础.
Construction of a MCF-7 Stable Cell Line with CDH1 Knocked out by CRISPR/Cas9 Gene Editing Technology

高伟健、朱一超、郑幽、张波、王征旭、孙强

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解放军医学院,北京 100853

解放军总医院第七医学中心 生物治疗中心,北京 100700

军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071

空军军医大学,陕西 西安 100038

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CDH1基因 MCF-7细胞 CRISPR-Cas9

2020

生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
年,卷(期)：2020.31(2)
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