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慢病毒介导的靶向c-Met可诱导shRNA稳定乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建及生物活性鉴定

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目的:探讨适当敲除c-Met后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法:设计3条针对c-Met基因不同位点的短发夹RNA(shRNA)片段,将其连接到TA载体上,瞬时转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR、Western印迹检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,挑选沉默效率最佳的shRNA.以scramble为阴性对照,MDA-MB-231细胞为空白对照,挑选沉默效率最佳的TA-shRNA,并将其与pSD400慢病毒载体连接,利用293T细胞进行慢病毒组装,收集病毒液并感染MDA-MB-231细胞,将嘌呤霉素与MDA-MB-231细胞共培养,筛选稳定表达shRNA的细胞株.利用多西环素对稳定细胞系进行诱导,Western印迹检测稳定细胞系c-Met蛋白的表达量,MTT法检测敲低c-Met对稳定细胞系增殖的影响.结果:测序结果表明模板序列与设计序列正确,并筛选出沉默效率最高的shRNA为shRNA1,慢病毒包装后筛选出稳定细胞株,适当敲除MDA-MB-231细胞c-Met基因后细胞的增殖明显低于对照组.结论:构建了针对c-Met基因可诱导shRNA的乳腺癌稳定细胞系,为探讨适当敲除c-Met基因后乳腺癌细胞对化疗、放疗敏感性检测奠定了基础.
Construction and Biological Activity Identification of Breast Cancer MDA-MB-231 Stable Cell Line with Lentivirus-Me⁃diated shRNA Targeting c-Met

王金西、郭晓娟、程锦红、张绍东、焦保庭、檀晓东

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邯郸市第一医院 普外四科,河北 邯郸 056002

邯郸市中心医院 病理科,河北 邯郸 056001

c-Met 短发夹RNA(shRNA) 慢病毒 MDA-MB-231细胞

邯郸市科学技术研究与发展计划

1723208066-1

2020

10.3969/j.issn.1009-0002.2020.04.003

生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
年,卷(期)：2020.31(4)
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