摘要
目的:构建铜绿假单胞菌PAO1的waaL基因缺失株,并通过在缺失株中建立糖基化系统,合成糖蛋白.方法:采用同源双交换法敲除铜绿假单胞菌PAO1株脂多糖合成途径中的O-抗原连接酶基因waaL,并利用PCR和脂多糖银染对敲除株的基因型和表型进行验证;随后导入可共表达糖基转移酶PglL和重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)的糖基工程载体,经IPTG诱导后利用免疫印迹检测糖蛋白的表达情况.结果:PCR和脂多糖银染鉴定表明敲除了PAO1的waaL基因,缺失株和野生株的生长状态及糖代谢情况几乎无差异;在缺失株中导入糖基工程载体并诱导表达,免疫印迹结果表明PAO1的O-抗原多糖能够在PglL催化下转移到底物蛋白rCTB,从而得到了PAO1多糖-蛋白结合物(糖蛋白).结论:构建了铜绿假单胞菌PAO1的waaL缺失突变体,并在突变株内建立了糖基化系统,合成了一种PAO1多糖-蛋白结合物,为下一步糖蛋白纯化以及制备铜绿假单胞菌多糖结合疫苗奠定了基础.
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