首页|铜绿假单胞菌waaL突变体构建及糖基化系统的建立

铜绿假单胞菌waaL突变体构建及糖基化系统的建立

扫码查看
原文链接
  • NETL
  • NSTL
  • 万方数据
  • 维普
目的:构建铜绿假单胞菌PAO1的waaL基因缺失株,并通过在缺失株中建立糖基化系统,合成糖蛋白.方法:采用同源双交换法敲除铜绿假单胞菌PAO1株脂多糖合成途径中的O-抗原连接酶基因waaL,并利用PCR和脂多糖银染对敲除株的基因型和表型进行验证;随后导入可共表达糖基转移酶PglL和重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)的糖基工程载体,经IPTG诱导后利用免疫印迹检测糖蛋白的表达情况.结果:PCR和脂多糖银染鉴定表明敲除了PAO1的waaL基因,缺失株和野生株的生长状态及糖代谢情况几乎无差异;在缺失株中导入糖基工程载体并诱导表达,免疫印迹结果表明PAO1的O-抗原多糖能够在PglL催化下转移到底物蛋白rCTB,从而得到了PAO1多糖-蛋白结合物(糖蛋白).结论:构建了铜绿假单胞菌PAO1的waaL缺失突变体,并在突变株内建立了糖基化系统,合成了一种PAO1多糖-蛋白结合物,为下一步糖蛋白纯化以及制备铜绿假单胞菌多糖结合疫苗奠定了基础.
Construction of waaL Deletion Mutant of Pseudomonas aeru-ginosa and Establishment of Glycosylation System

徐涵、潘超、黄竞、冯尔玲、朱力、王恒樑

展开 >

军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071

铜绿假单胞菌 waaL缺失突变体 多糖结合疫苗 糖蛋白

国家自然科学基金青年基金

31700802

2020

10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.002

生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
年,卷(期)：2020.31(6)
  • 2
  • 3
  • 4