生物技术通讯2020，Vol.31Issue(6) ：653-658.DOI:10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.005

食甲基菌吡咯喹啉醌生物合成相关基因的筛选及表型鉴定

Screening and Phenotypic Identification of Gene Related to Biosynthesis of Pyrroloquinoline Quinone in Methylovorus sp. J1-1

薄明井 寇航 陈静 张惟材 葛欣 熊向华
生物技术通讯2020，Vol.31Issue(6) ：653-658.DOI:10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.005
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食甲基菌吡咯喹啉醌生物合成相关基因的筛选及表型鉴定

Screening and Phenotypic Identification of Gene Related to Biosynthesis of Pyrroloquinoline Quinone in Methylovorus sp. J1-1

薄明井 1寇航 2陈静 1张惟材 2葛欣 3熊向华2
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作者信息

  • 1. 河北大学 生命科学学院,河北 保定 071000;军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071
  • 2. 军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071
  • 3. 河北大学 生命科学学院,河北 保定 071000
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摘要

目的:通过Tn5转座诱变筛选食甲基菌中吡咯喹啉醌(PQQ)生物合成相关基因.方法:通过Tn5转座诱变食甲基菌J1-1,筛选PQQ合成水平变化明显的突变株,利用质粒拯救法鉴定突变位点,进而敲除对应基因验证其与PQQ合成的关系,再检测野生菌及敲除菌的NADH和NAD+含量.结果:构建了库容量为1.0×105的Tn5转座突变体库,筛选得到1株PQQ合成水平显著下降的突变株5-179,经鉴定Tn5转座子插入染色体第705454位,位于mpq-0708基因内部(705337～705933),该基因编码NADH醌氧化还原酶亚基C;通过同源重组敲除J1-1中mpq-0708基因,敲除菌在高产培养基中PQQ合成水平显著下降,仅为野生菌的3.15％,与5-179突变株表型相符;野生菌及敲除菌NADH与NAD+测定结果表明,NADH/NAD+比值代表的菌体能量代谢状态与PQQ生物合成及菌体生长显著关联.结论:mpq-0708基因可能通过能量代谢参与PQQ生物合成.

关键词

Tn5转座/吡咯喹啉醌/NADH/NAD+/能量代谢/食甲基菌

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基金项目

国家科技重大专项(2018X09J18109-003)

出版年

2020
生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
浏览量2
参考文献量5
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