生物技术通讯2020，Vol.31Issue(6) ：675-680.DOI:10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.008

ACE2-mCherry融合基因表达载体的构建及功能验证

Construction and Functional Verification of ACE2-mCher-ry Fusion Gene Expression Vector

蒋晓祎 侯欣妤 张波 任禾 牛祖彪 郑幽 王雨琪 孙强 黄红艳
生物技术通讯2020，Vol.31Issue(6) ：675-680.DOI:10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.008
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ACE2-mCherry融合基因表达载体的构建及功能验证

Construction and Functional Verification of ACE2-mCher-ry Fusion Gene Expression Vector

蒋晓祎 1侯欣妤 1张波 1任禾 1牛祖彪 2郑幽 2王雨琪 2孙强 2黄红艳3
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作者信息

  • 1. 首都医科大学 附属北京世纪坛医院肿瘤内科,北京 100038;军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071
  • 2. 军事医学研究院 生物工程研究所,北京 100071
  • 3. 首都医科大学 附属北京世纪坛医院肿瘤内科,北京 100038
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摘要

目的:构建带有荧光标记的血管紧张素转化酶2(ACE2)表达载体,并初步验证该表达载体的功能.方法:采用PCR方法,从载体pcDNA3.1-ACE2-3xFlag中扩增得到目的基因片段ACE2,用限制性内切酶XhoⅠ和AgeⅠ对载体质粒pQCXIP-mCherry-Lamp进行双酶切,回收得到线性化载体后与扩增的ACE2片段同源重组,得到目的载体pQCXIP-ACE2-mCherry.测序成功后,将构建的pQCXIP-ACE2-mCherry重组质粒及表达SARS-CoV-2的S蛋白的质粒pSec-SARS-CoV-2-S同时瞬时转染293T细胞,48 h后通过活细胞拍摄观察胞膜融合现象,Western印迹检测蛋白表达.结果:构建了表达人ACE2蛋白以及荧光标记蛋白mCherry的真核表达载体pQCXIP-ACE2-mCherry,与pSec-SARS-CoV-2-S共转染293T细胞后胞膜发生融合.结论:通过同源重组技术构建了载体pQCXIP-ACE2-mCherry,其研究思路可供SARS-CoV-2病毒研究借鉴.

关键词

血管紧张素转化酶2/同源重组/SARS-CoV-2

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基金项目

北京市教委-市自然科学基金联合项目/北京市教委科技计划重点项目(KZ202110025029)

出版年

2020
生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
浏览量2
被引量1
参考文献量1
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