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利用特异性抗体建立金黄色葡萄球菌肠毒素B快速检测方法

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目的:利用特异性靶向金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的抗体建立2种体外快速检测SEB的方法.方法:通过间接ELISA法及生物膜干涉技术测定3株抗体(LXY8、LXY9和LXY10)与SEB的结合活性;通过竞争ELISA法鉴定3株抗体的表位交叉情况;利用配对抗体建立双夹心ELISA检测法和胶体金试纸条层析技术检测SEB.结果:3株抗体与SEB均具有较高的亲和力(LXY8:KD=5.25×10-10 mol/L;LXY9:KD=5.18×10-9 mol/L;LXY10:KD=8.93×10-10 mol/L);经间接ELISA法获得生物素标记的抗体与SEB结合的最低饱和浓度为0.25μg/mL,以该浓度作为抗原表位竞争的浓度,竞争ELISA结果表明3株抗体与SEB结合的表位不交叉;根据双夹心配伍实验的结果,获得LXY8与LXY10的最佳配对,SEB的最低检测限为240 pg/mL,而基于LXY8与LXY10配对的胶体金检测试纸条能够在5～10 min内完成样品的检测,且检测灵敏度约为2 ng/mL.结论:基于双夹心酶联免疫吸附技术建立了一种特异、灵敏的体外检测SEB的方法,利用胶体金层析技术开发了SEB快速检测的胶体金检测试纸条,能够实现SEB现场快速高效检测.
Establishment of Rapid Detection Methods for Staphylococ-cal enterotoxin B Using Specific Antibodies

周刘忠、胡乃静、张丁木、王志宏、吴佳果、罗龙龙、石艳春

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内蒙古医科大学,内蒙古自治区分子生物学重点实验室,内蒙古 呼和浩特 010058

军事医学研究院 毒物药物研究所,重大疫情应急防控药物研究室,北京 100850

金黄色葡萄球菌肠毒素B 检测抗体 双夹心酶联免疫吸附检测法 胶体金层析检测法

国家重大科技专项新药创制课题

2018ZX09J18101-002

2020

10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.016

生物技术通讯
军事医学科学院生物工程研究所

生物技术通讯

CSTPCD
影响因子：0.385
ISSN：1009-0002
年,卷(期)：2020.31(6)
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