摘要
[目的]在HEK293细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factor,hFⅦ)蛋白.[方法]通过PCR分别扩增与hFⅦ羧基化有关的酶(γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1))基因序列,与hFⅦ基因片段构建真核表达载体pCAE-VKORC1-GGCX-hFⅦ,利用脂质体将表达载体转入HEK293细胞,采用Western blotting和ELISA方法检测细胞上清中hFⅦ的表达水平,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血活性.[结果]Western blotting检测细胞上清中含有hFⅦ蛋白,经ELISA检测表达量为12 mg/L,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血相对比活性为612％.[结论]该表达载体成功在HEK293细胞中瞬时表达hFⅦ蛋白,为进一步深入研究hFⅦ的生物学特性奠定了基础.
基金项目
山西省重点研发计划项目(201603D321108)
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