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高AT含量DNA片段PCR扩增体系的优化

PCR system optimization for the efficient amplification of AT-rich DNA fragments

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选用4种不同长度(1.0～5.4 kb)、高AT含量(72％～80％)的真菌线粒体DNA片段,通过比较4种PCR添加剂(牛血清白蛋白(BSA)、二甲基亚砜(DMSO)、甲酰胺和镁离子)和4种KOD系列DNA聚合酶(KOD-Plus-、KOD-Plus-Neo、KOD FX和KOD FX Neo)对PCR扩增效果的影响,优化高AT含量DNA片段的PCR扩增体系.结果 表明:当PCR体系中单独使用1种添加剂时,只有镁离子能够促进扩增,其他3种添加剂都不能产生预期扩增条带.BSA和DMSO对镁离子的扩增促进作用无负面影响,而甲酰胺会抑制镁离子的扩增促进作用.当镁离子存在时,4种KOD聚合酶的PCR体系均可获得预期的扩增产物;当缺乏镁离子时,使用KOD-Plus-或KOD-Plus-Neo聚合酶的PCR体系未能得到扩增产物,表现出对镁离子的依赖性.镁离子对高AT含量DNA片段的扩增具有促进作用,最佳使用浓度为1.75 mmol/L.研究结果为其他真核生物中高AT含量DNA片段的扩增提供了方法依据.

张姝、张永杰、郝爱静

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山西大学应用化学研究所,山西太原030006

山西大学生命科学学院,山西太原030006

添加剂 PCR扩增 高AT含量DNA片段 镁离子

国家自然科学基金山西省自然科学基金山西省回国留学人员科研资助项目

31872162201601D0110652017-015

2020

陕西师范大学学报(自然科学版)
陕西师范大学

陕西师范大学学报(自然科学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.563
ISSN：1672-4291
年,卷(期)：2020.48(5)
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