细胞周期依赖性激酶抑制蛋白B(cyclin dependent kinase inhibitors B,CDKNIB,即p27)可以抑制细胞周期蛋白-细胞周期蛋白依赖性激酶复合物,阻滞细胞周期进程.通过克隆获得奶山羊p27基因序列并阐明其编码蛋白的生物学特性,利用RN Ai干扰技术和基因过表达技术沉默和上调奶山羊乳腺上皮细胞中p27基因的表达,以探究p27基因对乳腺上皮细胞增殖的影响.以西农萨能奶山羊乳腺组织为实验材料,扩增并克隆出奶山羊p27基因CDS全长序列,其全长597 bp,编码198个氨基酸.对p27基因编码蛋白进行生物信息学分析,发现其为亲水性不稳定蛋白,无跨膜结构.利用实时荧光定量PCR检测奶山羊p27基因mRNA在不同时期乳腺组织中的表达情况,发现p27基因在泌乳期的表达量高于干奶期.将构建的p27基因真核表达质粒转染奶山羊乳腺上皮细胞,使用CCK-8、Edu染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测p27基因对乳腺上皮细胞增殖的影响,发现过表达p27基因抑制了乳腺上皮细胞的增殖和DN A合成,并使得CDK2蛋白表达水平升高(P<0.05).上述结果提示p27可作为负调节因子参与乳腺上皮细胞增殖,研究结果为p27调控乳腺发育的分子机理提供了基础资料.
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