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水母雪莲ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

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目的 优化并建立适合于水母雪莲的ISSR-PCR反应体系并筛选出稳定的ISSR引物.方法 采用L16(45)正交设计方法,以TaqDNA聚合酶浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度5种因素4个水平对水母雪莲ISSR-PCR反应体系进行优化;并对反应体系进行验证.采用优化后的反应体系筛选出条带清晰且稳定的ISSR引物,通过退火温度梯度试验确定最佳退火温度.结果 最终确立了水母雪莲20μl ISSR-PCR最佳反应体系,即包含TaqDNA聚合酶0.7U、dNTP 0.125mmol/L、引物0.3μmol/L、模板DNA 40ng、Mg2 1.5mmol/L.在此基础上,从84条ISSR引物中筛选出条带清晰且稳定的8条引物,并通过梯度PCR反应确定最佳退火温度.结论 经过11份水母雪莲种质验证,证明所建立的体系稳定可靠,可用于后续水母雪莲遗传多样性分析和种质资源鉴定.

王钧、王建科、石琳、胡延萍、杨文韬、李毅、王莉

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中国科学院西北高原生物研究所,青海西宁810000

中国科学院大学,北京100049

山东大学生命科学学院,山东济南250100

水母雪莲 ISSR-PCR 正交设计 反应体系 引物筛选

国家自然科学基金青海省(应用)基础研究计划

313002692013-N-756

2016

10.3969/j.issn.1008-0805.2016.08.039

时珍国医国药
时珍国医国药杂志社

时珍国医国药

CSCD北大核心
影响因子：0.887
ISSN：1008-0805
年,卷(期)：2016.27(8)
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