基于Wnt/β-catenin信号通路探讨八珍荔核抗纤方对HSC活化增殖、迁移的影响

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中文摘要：目的观察八珍荔核抗纤方对HSC-T6活化增殖、迁移的影响，并探讨其作用机制。方法将雄性SD大鼠随机分为空白对照组和八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组，空白对照组用生理盐水灌胃，含药血清低、中、高组以纯水溶解八珍荔核抗纤方颗粒进行灌胃。换算成SD大鼠的低、中、高剂量分别为7。96g·kg-1、15。93g·kg-1、31。86g·kg-1;连续灌胃7d，最后取血制备空白血清和含药血清。通过噻唑蓝(MTT)法测定TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化的最佳浓度及不同浓度，八珍荔核抗纤方含药血清对TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化增殖影响。细胞划痕愈合法测定八珍荔核抗纤方含药血清对HSC-T6细胞迁移的影响;免疫荧光法测定HSC活化相关指标Col Ⅰ、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路核心因子β-catenin表达的影响，蛋白质印迹法(western blot)测定八珍荔核抗纤方对HSC活化相关蛋白Col Ⅰ、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、p-GSK3β、Cyclin D1表达的影响;qPCR测定八珍荔核抗纤方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt1、β-catenin、Cyclin D1表达的影响。结果 MTT实验结果显示，rhTGF-β1刺激HSC-T6活化的最佳浓度为10ng/ml;与模型组比较，八珍荔核抗纤方低、中、高含药血清均能抑制rhTGF-β1刺激的HSC-T6细胞增殖活化(P＜0。05)，其抑制强度具有剂量依赖性(P＜0。05)。划痕实验结果显示，与模型组相比，八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组的细胞迁移能力减弱(P＜0。05)，且具有剂量依赖性(P＜0。05)。Western Blotting实验结果显示，与模型组比较，八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col Ⅰ、α-SMA及β-catenin蛋白表达水平均降低(P＜0。05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平降低(P＜0。05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平无明显变化(P＞0。05)。免疫荧光实验结果显示，与模型组比较，八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col Ⅰ、α-SMA及细胞核内β-catenin平均荧光强度均降低(P＜0。05)。qPCR实验结果显示，与模型组比较，八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组β-catenin基因表达水平均降低(P＜0。05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平降低(P＜0。05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平无明显变化(P＞0。05)。结论八珍荔核抗纤方可以抑制HSC的活化增殖、迁移，减少ECM合成进而抗肝纤维化，可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

作者：

唐燕、司马玲、王婷、秦百君、唐梅文、罗伟生

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作者单位：

广西中医药大学,广西南宁 530001

关键词：

八珍荔核抗纤方 Wnt/β-catenin信号通路 HSC 增殖迁移

基金：

国家自然科学基金全国名老中医药专家传承工作室建设项目(2022)广西壮族自治区研究生教育创新计划

项目编号：

82160834国中医药人教函[2022]75号YCBXJ2021021

出版年：

2024

DOI：

10.3969/j.issn.1008-0805.2024.01.02

时珍国医国药

时珍国医国药杂志社

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北大核心

影响因子：0.887

ISSN：1008-0805

年,卷(期)：2024.35(1)

参考文献量29