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补阳还五汤黄芪不同配比组方通过ROCK信号通路抑制动脉粥样硬化的机制研究

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目的 观察补阳还五汤(BYHWD)黄芪不同配比组方通过调控ROCK信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein，ox-LDL)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(A10)氧化应激及炎性反应的影响，探讨补阳还五汤黄芪不同配比组方抑制动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)的作用机制，明确补阳还五汤黄芪最佳配比组方抗AS的新靶点和新思路。方法 将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为空白对照组、模型对照组、BYHWD黄芪低剂量组(黄芪30g)、BY-HWD黄芪中剂量组(黄芪60g)、BYHWD黄芪高剂量组(黄芪90g)、BYHWD黄芪超高剂量组(黄芪120g)、辛伐他汀组。除空白对照组外，其他治疗组均在ox-LDL刺激后予以BYHWD黄芪低、中、高、超高剂量含药血清和辛伐他汀血清干预。采用MTT法检测不同组别细胞的活力情况;试剂盒检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)的水平;免疫荧光法检测基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase2，MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase 9，MMP-9)的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit 1，MYPT-1)、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基 1(Phosphorylation myosin phosphatase target sub-unit 1，p-MYPT-1)、肌球蛋白轻链磷酸酶(Myosin light chain Phosphorylase，MLCP)、组织因子(Tissue factor，TF)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的蛋白表达水平。结果 MTT实验结果显示，与空白对照组和模型对照组相比，补阳还五汤黄芪不同配比各组间和辛伐他汀组细胞活力明显增强(P＜0。05);试剂盒检测结果显示，与模型对照组相比，补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀含药血清干预后，细胞上清液中SOD、CAT水平上升，MDA水平降低(P＜0。05);免疫荧光结果显示，补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀组MMP-2、MMP-9阳性细胞数量明显减少(P＜0。05);Western Blot结果显示，与正常对照组相比，模型对照组MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP、TF、PAI-1蛋白的表达量明显增多，经过补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量和辛伐他汀含药血清干预治疗后，各组细胞MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP、TF、PAI-1蛋白的表达量明显降低(P＜0。05)。补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组各组间比较，黄芪超高剂量组(黄芪120g)的蛋白表达水平明显少于其他黄芪不同配比组方各组(P＜0。05)。BYHWD黄芪超高剂量(黄芪120g)组与辛伐他汀组相比，BYHWD黄芪超高剂量(黄芪120g)组p-MYPT-1、MLCP、TF的蛋白表达水平较低(P＜0。05)。结论 补阳还五汤黄芪不同配比组方可能有调控ROCK信号通路，下调MYPT-1、p-MYPT-1、MLCP表达，抑制动脉粥样硬化氧化应激及炎性反应的作用，其中补阳还五汤黄芪超高剂量组(黄芪120g)的治疗效果最佳。

王静依、李娟、周欣欣、郭淑婷、刘建春、曾群、董秋菊、郭春兰、马存根、张红珍

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山西中医药大学第三临床学院/山西中医药大学神经生物学研究中心/国家中医药管理局多发性硬化益气活血重点研究室,山西晋中 030619

山西大同大学脑科学研究所,山西大同 037009

动脉粥样硬化 补阳还五汤 黄芪不同配比组方 ROCK信号通路

国家自然科学基金面上项目山西省研究生科研实践类项目山西中医药大学开放课题山西中医药大学校级科研项目

813735322023KY6772022-XK-0012022TD2006

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10.3969/j.issn.1008-0805.2024.01.07

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