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活血化瘀解毒方对脑缺血再灌注大鼠脑细胞自噬的影响

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目的 探讨活血化瘀解毒方对脑缺血再灌注大鼠脑细胞自噬的影响。方法 80只SD大鼠随机分为假手术组12只、手术组66只。手术组采用线栓法制备大脑中动脉闭塞脑缺血/再灌注(MCAO)模型，假手术组仅分离血管不插栓。大鼠清醒后，进行神经功能缺损(mNss)评分，手术组根据评分情况进行分层随机分组，分为模型组、依达拉奉组、活血化瘀解毒方(HXHYJDF)组、3-MA组、3-MA+HXHYJDF组，每组各12只。各组予以相应干预，7d后再次进行mNss评分，而后处死取材。通过血液流变学观察大鼠腹主动脉血(低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度)血瘀情况;HE染色观察大鼠缺血侧脑皮质层组织病理形态变化;透射电镜观察大鼠脑缺血侧皮质层神经细胞自噬小体超微结构;Western blot法检测大鼠脑缺血侧皮质组织ATG-13(自噬相关蛋白13)、VPS34(哺乳动物中的第Ⅲ类PI3 Kinase)、LC3(微管相关蛋白1轻链3)蛋白表达情况。结果 (1)与假手术组相比，模型组第1天神经功能缺损评分明显升高(P＜0。05)，且第7天评分未有明显降低，低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度均升高(P＜0。05)，病理改变明显，电镜下神经细胞结构损伤，线粒体肿胀，自噬泡清晰可见，ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显增加(P＜0。05)。(2)与模型组相比，各药物干预组神经功能缺损评分第1天差异无统计学意义(P＞0。05)，第7天评分均明显降低(P＜0。05)，低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度水平均有所下降(P＜0。05)，脑组织病理改变有所改善，电镜下神经细胞结构损伤减轻，可见轻微肿胀线粒体结构，未见明显自噬体结构，依达拉奉组及HXHYJDF组ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显减少(P＜0。05)，3-MA组可能由于3-MA对Ⅰ PI3K和ⅢPI3K时相性抑制，ATG-13、VPS34表达无明显降低(P＞0。05)，LC3-Ⅱ/Ⅰ 表达水平较 HXHYJDF 组也有明显升高(P＜0。05)，而 3-MA+HXHYJDF 组较 3-MA 组 ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达均有不同程度的下调。结论 活血化瘀解毒方可减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤，可能与抑制细胞自噬，下调自噬相关蛋白ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平有关。

陈佳敏、陈心豪、李花、刘旺华

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活血化瘀解毒方 自噬 脑缺血再灌注 ATG-13 VPS34 LC3-Ⅱ/Ⅰ

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