摘要
目的 建立一种基于功能化适配体与双重恒温扩增反应结合的荧光传感技术,对中药材中黄曲霉毒素进行精准检测.方法 通过可行性分析,验证双重恒温扩增反应和本传感器的理论正确性与实验准确度;对Vent(exo-)DNA聚合酶浓度、Nt.BstNBI切口酶浓度、反应时间进行实验条件优化,以提高检测的灵敏度;在最佳反应条件下建立标准曲线,确定检测范围;检测多种毒素,以验证本方法的特异性;通过与商品化试剂盒检测范围比较,研究该方法的优越性;检测多种中药饮片中的黄曲霉毒素,探究该方法在实际样品中的应用潜力.结果 最佳反应条件是Vent(exo-)DNA聚合酶浓度为 0.06 U·μL-1、Nt.BstNBI 切口酶浓度为 0.2 U·μL-1、反应时间为 75 min.标准曲线为 Y=1141.6162X+4271.1145(R2=0.9935),检测范围为0.02 ng·mL-1至10.00 ng·mL-1.该方法对黄曲霉毒素响应好,其他4种无关毒素无荧光响应.商品化试剂盒检测的标准曲线为Y=2.2768X+0.4594(R2=0.9818),检测范围为0.1 ng·mL-1至1.0 ng.mL-1,对12种中药饮片中黄曲霉毒素的检出率为41.67％;该方法对黄曲霉毒素的检出率为50％.结论 该法的灵敏度高、特异性强,比商品化试剂盒的检测范围更宽、检测限低,且检测结果基本一致,具备较强的实际应用能力、更大的应用潜力.
基金项目
湖北中医药大学创新训练计划(S202310507005)
湖北中医药大学博士启动经费项目(2023ZXB015)
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