摘要
目的 基于受体交联蛋白激酶3(RIPK3)探讨马钱苷对心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的作用及机制.方法 分别使用马钱苷和(或)RIPK3激动剂Necrolr 1预处理H9C2心肌细胞24 h后构建H/R模型,使用CCK-8检测心肌细胞活力,使用ELISA法检测LDH释放水平,使用药物-分子对接分析马钱苷与RIPK3的分子作用,使用Hoechst/PI荧光双染色观察凋亡和程序性坏死比率,使用Calcein AM探针检测线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放程度,使用Western blot检测 p-RIPK3、t-RIPK3、p-MLKL、t-MLKL、Cyt-c、cleaved Caspase-9 和 cleaved Caspase-3 的蛋白表达水平.结果 一般状态下,马钱苷预处理对心肌细胞无明显毒性用,在H/R处理后发现25 μmol/L马钱苷可显著升高细胞活力并降低LDH释放水平.药物-分子对接预测马钱苷与RIPK3具有可靠的结合位点,结合力为-5.68 kcal/mol.马钱苷预处理可降低 Hoechst/PI 阳性率,抑制 mPTP 开放,并同时下调 p-RIPK3、p-MLKL、Cyt-c、cleaved Caspase-9 和 cleaved Caspase-3等程序性坏死和细胞凋亡相关蛋白的表达水平,而马钱苷和RIPK3激动剂Necrolr 1共处理则可显著削弱马钱苷对程序性坏死和细胞凋亡的抑制作用.结论 马钱苷通过抑制RIPK3的磷酸化活化以同时抑制细胞凋亡和程序性坏死的发生,从而有效减轻心肌细胞H/R损伤.
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