目的 观察左归丸中有效成分马钱苷、山奈酚对衰老骨髓间充质干细胞(BMSCs)的影响,并基于AGEs-RAGE轴进一步探讨其作用机制.方法 原代培养大鼠BMSCs,采用免疫荧光染色鉴定细胞表面标记物;MTT重复实验观察马钱苷、山奈酚对BMSCs增殖影响并确定最佳用药时间及浓度;D-半乳糖(D-gal)诱导建立衰老BMSCs模型,采用B-半乳糖苷酶染色确定最佳造模浓度并分别观察低、中、高浓度马钱苷、山奈酚对衰老BMSCs数目的影响;取P3代细胞,随机分为空白对照组、D-gal衰老造模组、D-gal+马钱苷组、D-gal+山奈酚组,采用Real-time荧光定量PCR检测衰老相关分泌表型(SASP,选取IL-6、HMGB1、GATA-4、TRAF3IP2)及衰老相关分子(p16、p21、p53)mRNA 表达,Western blot法检测RAGE、Glo1、NF-κB蛋白表达;ELISA法检测AGEs含量及Glo1活性.结果 实验浓度的马钱苷和山奈酚在24h和48h均有促进BMSCs增殖的作用,且与衰老造模组比较,低、中、高浓度的马钱苷和山奈酚都能不同程度地减少衰老BMSCs数目.与空白对照组比较,D-gal衰老造模组的IL-6、p53、p21、p16 mRNA表达都显著增高(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05);与D-gal衰老造模组相比,马钱苷能明显降低IL-6、GATA-4 mRNA表达(P＜0.001,P＜0.05),山奈酚则能显著降低IL-6、TRAF3IP2和p21 mRNA表达(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05).与空白对照组比较,D-gal衰老造模组AGEs含量明显升高(P＜0.001),Glo1活性显著降低(P＜0.001),RAGE、NF-κB蛋白表达有升高的趋势;与D-gal衰老造模组比较,山奈酚能显著降低RAGE蛋白表达(P＜0.05),马钱苷和山奈酚均能明显上调Glo1 的活性(P＜0.001)、降低 NF-κB 蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01)及 AGEs 含量(P＜0.01,P＜0.001).结论 左归丸中有效成分马钱苷、山奈酚均能促进BMSCs增殖,减少SASP和衰老相关分子的表达从而延缓BMSCs衰老,其机制可能与调节AGEs-RAGE轴及其下游分子表达有关.
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