目的 通过观察石萆汤干预CTX诱导的少弱精子症大鼠模型的治疗效果,分析其对生精细胞凋亡及P53/Bax/Caspase3信号通路的蛋白表达的影响.方法 采用复制CTX诱导的少弱精子症大鼠模型,通过给予石萆汤干预,观察了大鼠体重变化和精子质量.研究还采用了 HE染色、TUNEL染色法、免疫组织化学法、qPCR法以及Western blotting法来评估睾丸组织的形态学和分子生物学特征.结果 ①精子质量:与正常对照组相比较,模型组的精子密度、精子活力均下降(P＜0.05),精子活率低于正常对照组,但不具有差异(P＞0.05);而与模型组相比,石萆汤中、低剂量组的精子密度显著高于模型组(P＜0.05),但活力与活率与模型组无差异(P＞0.05).②HE染色:正常组大鼠睾丸组织中可见各级生精细胞排列整齐,形态规则,染色均匀,生精小管管腔饱满,存在较多精子细胞.与对照组相比,模型组小鼠生精细胞排列不整齐,层次减少,精子细胞明显减少.与模型组相比,石萆汤组的上述病理状态有所改善,生精细胞形态及排列较为正常,与正常组接近.③TUNEL染色:正常对照组大鼠睾丸组织形态正常、排列整齐,仅有少量凋亡细胞;与正常组比较,模型组大鼠细胞凋亡数量明显增多(P＜0.05);与模型组相比,石萆汤高、低剂量组细胞凋亡数有下降的趋势,但不具有差异性(P＞0.05);石萆汤中剂量组细胞凋亡数降低,且差异具有统计学意义(P＜0.05).④免疫组化:在模型组中,细胞质中P53、Bax、Cytc的表达增多(P＜0.05),而石萆汤处理组中这些蛋白的表达相对减少(P＜0.05).⑤qPCR:与正常对照组比较,模型组大鼠p53、BaxmRNA含量升高(P＜0.05),而Bcl-2 mRNA含量降低(P＜0.05).与模型组比较,石萆汤组Bax mRNA含量明显降低(P＜0.05),而p53、Bcl-2 mRNA含量降低(P＜0.05);⑥Western Blot法:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸组织的 P53、Bax、Cytc、Apaf-1、Pro-caspase-9、Cleaved-caspase-9、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3蛋白质相对表达量显著升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白质表达显著降低(P＜0.05).与模型组比较,石萆汤组的P53、Bax、Cytc、Apaf-1、Pro-caspase-9、Cleaved-caspase-9、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3 蛋白质相对表达量明显减少(P＜0.05),Bcl-2蛋白质表达显著增高(P＜0.05);结论 石萆汤对CTX诱导的少弱精子症大鼠的精子质量有改善作用,其机制可能与P53/Bax/Caspase-3信号通路蛋白的表达有关.这一研究为深入理解石萆汤在治疗少弱精子症中的作用机制提供了实验证据.
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