摘要
目的 进一步阐明铁皮石斛(Dendrobium officinale)中木脂素生物合成的分子调控机制,克隆铁皮石斛木脂素合成关键酶基因DoPLR,分析其序列特征及表达模式.方法 根据NCBI中铁皮石斛PLR基因序列设计特异引物,利用PCR技术克隆铁皮石斛DoPLR基因,利用生物信息学软件分析DoPLR基因及编码蛋白的结构特征.利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测DoPLR基因在铁皮石斛不同组织部位、不同非生物胁迫、不同激素处理等情况下的表达模式.结果 克隆获得铁皮石斛DoPLR基因,该基因的开放阅读框(ORF)长度为933bp,编码310个氨基酸,蛋白相对分子质量和等电点分别为36.4 KDa和6.54;该蛋白含有NAD(P)+结合结构域,为亲水性蛋白,可能在细胞核中发挥作用,有29个磷酸化位点;该蛋白二级结构含有37.42％的α-螺旋、7.42％的β-折叠、36.77％的无规则卷曲和18.39％的延伸链;聚类分析表明该蛋白与亚麻LuPLR蛋白聚在一个分支上;互作蛋白分析表明丝氨酸苏氨酸蛋白激酶、转录因子bHLH63等蛋白可能与该蛋白发挥作用密切相关;qRT-PCR结果表明,DoPLR基因在不同组织部位、不同激素处理、不同非生物胁迫下的表达模式均存在差异,推测该基因可能参与铁皮石斛对非生物胁迫和激素的响应.结论 克隆获得了铁皮石斛DoPLR基因,分析了其序列特征和表达模式,为深入研究DoPLR基因的功能和铁皮石斛木脂素生物合成分子机制奠定基础.
基金项目
贵州省基础研究计划(自然科学类)(黔科合基础-ZK[2021]一般521)
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