目的 验证骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)通过细胞间线粒体转运机制修复心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),并探索养心通脉有效部位方(active principle region of Yangxin Tongmai Formula,apr-YTF)的作用机制,以期找到其更深层面的药用靶点.方法 采用安宁包缺氧体系进行氧糖剥夺4 h并及时复糖-复氧24 h制备MIRI细胞模型,无菌条件下从大鼠股骨、胫骨中提取BMSCs进行培养,取第四代建立BM-SCs-MIRI模型细胞共培养体系,并用apr-YTF含药血清进行干预.流式细胞仪检测心肌细胞凋亡水平和线粒体膜电位;激光共聚焦显微镜观察BMSCs-MIRI模型细胞间TNTs生成,并量化分析线粒体置换浓度;鉴定体系中微囊泡(Mi-crovesicles,MVs)的生成,对比各组浓度;Western blot法检测各组转运相关蛋白KIF5B、MIRO1、Cx43以及线粒体内膜蛋白mitofilin的表达.结果 经安宁包缺氧体系复制MIRI模型细胞凋亡增高,线粒体膜电位及mitofilin表达下降.与模型组比较,共培养组可生成TNTs,KIF5B、MIRO1、Cx43、mitofilin蛋白表达与线粒体膜电位增高,MVs生成增多,心肌细胞凋亡率下降.与空白对照组比较,apr-YTF组管内线粒体数量增加,KIF5B、MIRO1、Cx43、mitofilin蛋白表达、线粒体膜电位,及MVs生成都有所增加,心肌细胞凋亡率进一步下降.结论 BMSCs可通过TNTs、GJs与MVs细胞通讯方式挽救MIRI模型细胞线粒体功能,修复受损心肌细胞.apr-YTF可进一步上调BMSCs转运相关蛋白表达以及微囊泡的分泌,提高BMSCs修复MIRI细胞的能力.
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