补肾健脾方联合IFN-γ对Hepg2.2.15细胞IFN-γ/STAT1信号通路的影响

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中文摘要：目的研究补肾健脾方含药血清对γ干扰素(Interferon-gamma，IFN-γ)抗乙型肝炎病毒(Hepatitis b virus，HBV)的增效作用及可能机制。方法常规制备大鼠含药血清，WST-1法筛选含药血清干预Hepg2。2。15细胞的安全剂量;以不同浓度IFN-γ加补肾健脾方含药血清加入Hepg2。2。15细胞系，检测培养上清中乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B sur-face antigen，HBsAg)、乙型肝炎核心相关抗原(Hepatitis B e antigen，HBeAg)以及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(Hepatitis B Virus DNA，HBV DNA)水平，筛选补肾健脾方联合IFN-γ给药剂量;筛选出IFN-γ干预剂量后，将Hepg2。2。15细胞分为对照组、IFN-γ单独处理组、IFN-γ联合空白血清组以及IFN-γ联合补肾健脾方含药血清组，干预24h后，收集上清和蛋白样本，检测上清中HBsAg、HBeAg以及HBV DNA水平，蛋白免疫印迹(Western blot，WB)技术检测Hepg2。2。15细胞中 γ干扰素(Interferon-gamma，IFN-γ)/信号传导转录激活因子 1(Signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)信号通路关键蛋白蛋白，包括精氨酸甲基化转移酶1(Protein arginine methyltransferase 1，PRMT1)、STAT1、磷酸化信号传导转录激活因子1(p-signal transducer and activator of transcription 1，P-STAT1)以及抗病毒蛋白2'，5'-寡腺苷酸合成酶 3(2'-5'-oligoadenylate synthetase 3，OAS3)、双链 RNA 依赖的蛋白质激酶(Double-stranded RNA-dependent pro-tein kinase，PKR)、黏病毒耐药蛋白1(Recombinant Myxovirus Resistance 1，Mx1)蛋白表达水平。结果与IFN-γ单独处理组以及IFN-γ联合5％空白血清组相比，IFN-γ联合5％补肾健脾方含药血清干预Hepg2。2。15细胞24h后，细胞培养上清中HBV DNA、HBeAg水平显著降低(P＜0。05)，HBsAg未见明显变化(P＞0。05);IFN-γ联合5％补肾健脾方含药血清组γ干扰素受体2(Interferon gamma receptor 2，IFNGR2)蛋白表达水平较IFN-γ组显著上调(P＜0。05);IFN-γ联合 5％补肾健脾方含药血清组 γ 干扰素受体 1(Interferon gamma receptor 1，IFNGR1)、STAT1、P-STAT1、PRMT1、OAS3、Mx1蛋白表达水平较IFN-γ组和IFN-γ联合5％空白血清组显著升高(P＜0。05)。结论补肾健脾方含药血清对IFN-γ抗HBV产生增效作用，其作用机制可能与上调IFN-γ受体(IFNGR1)，激活IFN-γ/STAT1信号通路，进而上调IFN-γ下游抗病毒蛋白OAS3、Mx1表达有关。

作者：

刘影、郑建铭、刘甜甜、孙陈岑、徐汉辰、王磊

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作者单位：

上海中医药大学附属龙华医院,上海 200030

复旦大学附属华山医院,上海 200032

关键词：

补肾健脾方 IFN-γ STAT1 HBV 抗病毒蛋白

出版年：

2024

DOI：

10.3969/j.issn.1008-0805.2024.08.15