目的 通过SIRT1介导的线粒体自噬,探讨膝痹宁Ⅱ(XBN)和脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用保护膝骨关节炎(KOA)软骨细胞的作用机制.方法 大鼠软骨细胞随机分为空白组(CON组)、模型组(KOA组)、外泌体组(EXOs组)、膝痹宁Ⅱ含药血清组(XBN组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体组(XBN+EXOs组),观察膝痹宁Ⅱ含药血清及ADSC-Exos对退变软骨细胞的影响.将大鼠软骨细胞分为空白组(CON组)、模型组(KOA组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体组(XBN+EXOs组)、膝痹宁Ⅱ含药血清+外泌体+EX-527组(EX-527组),基于SIRT1介导的线粒体自噬观察膝痹宁Ⅱ含药血清联合ADSC-Exos对退变软骨细胞的影响.观察软骨细胞病理形态、线粒体自噬水平、软骨细胞退变相关蛋白及线粒体自噬相关蛋白表达水平.结果 外泌体示踪显示,ADSC-Exos能与软骨细胞线粒体结合.病理染色结果显示,经LPS干预后软骨细胞发生退变,ADSC-Exos和XBN含药血清联合干预可改善软骨退变;加SIRT1抑制剂EX-527后,其对软骨细胞损伤修复作用明显下降.与CON组比较,KOA组软骨细胞线粒体自噬水平下降(P＜0.05),软骨细胞MMP3、MMP13、ADAMTS5 蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Collagen Ⅱ、TIMP1、ACAN、PINK1、Parkin、p62 和 LC3A/B 蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).与KOA组比较,各治疗组软骨细胞线粒体自噬水平升高(P＜0.05),软骨细胞MMP3、MMP13、ADAMTS5 蛋白表达水平降低(P＜0.05),Collagen Ⅱ、TIMP1、ACAN、PINK1、Parkin、p62 和 LC3A/B 蛋白表达水平升高(P＜0.05).其中,XBN+Exos组改变最明显.SIRT1抑制剂EX-527干预后,这种调节作用明显降低(P＜0.05).结论 ADSC-Exos和XBN含药血清均能通过激活SIRT1/PINK1/Parkin信号通路,增强线粒体自噬,改善线粒体功能,延缓软骨细胞退变,且二者联合具有增效作用.
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