摘要
目的 探讨肾消解毒通络方含药血清调控黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡的作用机制.方法 常规制备含药血清,常规培养人肾小管上皮细胞HK-2.随机分为对照组、模型组、中药低、中、高剂量组与抑制剂组6组.对照组细胞在低糖培养基中培养,其他各组在高糖培养基中培养.中药组加入不同浓度的肾消解毒通络方(SJTR)含药血清,对照组和模型组加入等量正常血清,抑制剂组加入正常血清与Mito-tempo.细胞免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)表达;生化法检测上清液超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);透射电镜检测细胞线粒体损伤情况;Western Blot及免疫荧光法检测焦亡相关蛋白AIM2、具有Caspase激活及招募结构域的凋亡相关点状蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)及炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)表达;ELISA法检测上清液IL-1β、IL-18水平;TUNEL法及免疫荧光检测DNA损伤.结果 与对照组比较,模型组细胞ROS荧光亮度较强,线粒体形态发生改变嵴损伤膜破损;细胞上清液MDA表达水平升高,SOD表达水平降低(P＜0.05),炎症因子水平升高(P＜0.05);细胞AIM2等焦亡相关蛋白表达升高(P＜0.05);TUNEL染色阳性细胞数量表达明显增多.与模型组比较,中药中高剂量组与抑制剂组细胞ROS荧光强度降低,线粒体受损减轻;细胞上清液MDA表达水平降低,SOD表达水平升高(P＜0.05),炎症因子含量明显下降;细胞焦亡相关蛋白表达明显降低(P＜0.05);TUNEL染色阳性细胞数量降低.结论 SJTR含药血清可通过调控dsDNA-AIM2-GSDMD信号通路各分子表达,抑制HK-2细胞在高糖条件下产生的氧化应激及炎症反应,延缓细胞焦亡,从而维持细胞稳态.
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