以武都花椒为样品,采用有机溶剂浸提法提取试验样液,建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法同时测定花椒中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素含量的方法.用迪马Silversil-C18色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液-乙腈(68∶30∶2,V/V/V)进行等度洗脱,检测波长270 nm,流速1mL·min-1,进样量20 μL,柱温30℃.结果表明,羟基-a-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 8),其检测限分别为0.059,0.092和0.037μg·mL-1,定量限分别为3.91,6.16和2.45 ng,且检测方法的精密度、重复性、稳定性以及准确性良好.使用该方法测得12批次供试品中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素的含量分别为71.75~191.65,8.32~22.93和2.45~4.05 mg·g-1,相对标准偏差分别为 1.23%~3.99%,3.11%~4.98%和0.94%~3.54%.该方法适用于花椒中山椒素含量的测定,其结果可为武都花椒的质量评价与应用提供参考依据.