摘要
14-3-3蛋白是植物体内重要的信号转导调节分子,在碳代谢、逆境胁迫响应、生长发育等过程中发挥重要调控作用.为了深入解析14-3-3蛋白家族在木薯中的生物学功能,该研究采用酶切连接方法构建木薯14-3-3蛋白家族成员MeGRF3的原核表达载体,用热激法转化大肠杆菌Rosetta(DE3)株系,诱导表达带有MeGRF3的融合蛋白;使用纯化后的M eGRF3融合蛋白免疫新西兰公兔制备多克隆抗体,并检测抗体的效价和特异性.结果显示:(1)成功构建了木薯MeGRF3的原核表达载体pET-30a-MeGRF3,并诱导表达得到带有MeGRF3和6个His标签的融合蛋白.(2)MeGRF3融合蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为33 kD.(3)间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定的抗体效价为1024000.(4)Western blot分析显示,木薯叶片、茎尖、茎皮和块根中均检测到与M eGRF3蛋白大小一致的条带,说明M eGRF3在这4个组织器官中均表达,但主要是在茎尖和块根中大量积累,表明该研究成功制备的M eGRF3多克隆抗体的特异性较好.
基金项目
海南省自然科学基金(319MS092)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项-中国热带农业科学院院级创新团队项目(1630052017008)
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