摘要
丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine Protease Inhibitor,SPI)通过抑制靶蛋白活性参与调节内源蛋白平衡,并在植物发育、防御机制中发挥重要作用.该研究利用RACE技术克隆获得百子莲(Agapanthusp raecox ssp.orientalis)ApSPI基因全长序列,构建了E.coli Transetta(pET-32a-ApSPI)重组菌株,并检测重组菌株在不同非生物胁迫下的耐受性.结果 显示:(1)ApSPI基因全长为652 bp,开放阅读框为366 bp,编码122个氨基酸.(2)ApSPI蛋白含有一个N端信号肽和一个典型的Kazal结构域,是一种Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂.重组蛋白最佳诱导温度为37℃,诱导时间6h,IPTG浓度为0.1 mmol· L-1,且主要以可溶性形式存在.(3)重组菌非生物胁迫耐受性研究发现,重组菌Transetta (pET-32a-A pSPI)对NaCl(200～400 mmol·L-1)、KCl(200～400 mmol·L-1)和PEG6000(5％)的耐受性明显高于对照菌株T ransetta (pET-32a).研究表明,过表达ApSPI蛋白增强了大肠杆菌对盐、干旱胁迫的抗性,为进一步研究ApSPI在植物抗逆中的作用奠定了基础.
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