摘要
该研究基于番茄基因组数据库SGN(Sol Genomic Network)信息,利用RT-PCR从栽培番茄'M82'(Sola-num lycopersicum)中成功克隆到番茄SlWRKY6基因(登录号:Solyc02g080890),通过qRT-PCR方法和原核表达初步验证其生物学功能.结果表明:(1)生物信息学分析显示,番茄SlWRKY6基因ORF全长1653 bp,编码550个氨基酸,其蛋白结构含有1个WRKYGQK保守结构域和C2 H2锌指结构域,属于Ⅱb类;其基因启动子上游1500 bp含有多个激素响应元件和非生物胁迫响应元件.(2)进化树分析显示,SlWRKY6与潘那利番茄Sp-WRKY31-X1(NP_001352691.1)的相似性最高,且定位于细胞核内.(3)qRT-PCR结果显示,SlWRKY6基因在番茄根、茎、叶中均有表达,在叶中的表达量最高,且受盐和干旱诱导表达.(4)SDS-PAGE及Western blot结果显示,pET-30a-SlWRKY6重组蛋白的大小约66 kDa,与预期大小一致.(5)原核表达分析显示,重组菌E.coli BL21∷pET-30a-SlWRKY6在不同浓度盐(NaCl)和干旱(Mannitol)胁迫下生长速度显著低于对照菌E.coli BL21∷pET-30a,且在400 mmol/L NaCl、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下最为显著;滴板实验初步验证SlWRKY6转录因子能提高重组菌E.coli BL21∷pET-30a-SlWRKY6在ABA和pH 9(NaOH)胁迫的耐受性;在400 mmol/L NaCl、pH 5(HCl)、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下耐受能力降低.研究表明,SlWRKY6转录因子可能通过参与ABA途径来响应非生物胁迫.
基金项目
国家重点研发计划(2017YFD0101906)
新疆农业科学院重点项目前期预研专项(xjzdy-003)
现代农业产业技术体系专项(CARS-23-G25)
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